Sintesis Tetrapeptida FIGP sebagai Antioksidan Menggunakan Metode SPPS
DOI:
https://doi.org/10.29313/bcsp.v6i2.24552Keywords:
Antioksidan, Sintesis peptida, DPPHAbstract
Abstract. Free radicals trigger oxidative stress that contributes to various diseases, so antioxidants are required to counteract them. Previous research reported that the tetrapeptide Phenylalanine-Isoleucine-Glycine-Proline (FIGP) isolated from the skin of bluefin leatherjacket (Navodon septentrionalis) fish possesses antioxidant activity, but the limited yield obtained through isolation restricts its further application. This study aimed to synthesize FIGP using Solid Phase Peptide Synthesis (SPPS), to characterize the synthesized product, and to evaluate its antioxidant activity using the DPPH method. Synthesis was carried out on 2-chlorotrityl chloride resin through reactor conditioning, resin swelling, sequential coupling of Fmoc-protected amino acids (proline, glycine, isoleucine, phenylalanine) using HATU/HOAt/DIPEA, Fmoc deprotection, chloranil testing, and cleavage from the resin using TFA:TIS:Mili-Q (38:1:1). The crude peptide was characterized by reverse-phase HPLC and mass spectrometry, and antioxidant activity was expressed as the IC50 value. Synthesis was successfully performed with a resin loading value of 0.5 mmol. HPLC characterization indicated that sample purity was still low, as several minor peaks were observed, while mass spectrometry confirmed the formation of FIGP with a peak at m/z 431 [M−H]⁻. The DPPH assay yielded an average IC50 of 1522.525 ppm, indicating very weak or negligible antioxidant activity. Further purification using column chromatography with a C18 stationary phase and additional NMR characterization are recommended to confirm the purity and structure of the tetrapeptide.
Abstrak. Radikal bebas dapat memicu stres oksidatif yang berperan dalam berbagai penyakit sehingga diperlukan antioksidan untuk menetralisirnya. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa tetrapeptida Fenilalanin-Isoleusin-Glisin-Prolin (FIGP) hasil isolasi dari kulit ikan bluefin leatherjacket (Navodon septentrionalis) memiliki aktivitas antioksidan, namun keterbatasan hasil isolasi membatasi pemanfaatannya lebih lanjut. Penelitian ini bertujuan mensintesis FIGP menggunakan metode Solid Phase Peptide Synthesis (SPPS), mengkarakterisasi produk sintesis, serta mengevaluasi aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH. Sintesis dilakukan pada resin 2-klorotritil klorida melalui tahapan pengkondisian reaktor, pengembangan (swelling) resin, pengkoplingan berurutan asam amino berlindung Fmoc (prolin, glisin, isoleusin, fenilalanin) menggunakan reagen HATU/HOAt/DIPEA, deproteksi Fmoc, uji kloranil, dan pemutusan peptida dari resin menggunakan TFA:TIS:Mili-Q (38:1:1). Krud peptida yang diperoleh dikarakterisasi menggunakan KCKT fase terbalik dan spektrofotometri massa, sedangkan aktivitas antioksidan dinyatakan sebagai nilai IC50. Sintesis berhasil dilakukan dengan nilai loading resin sebesar 0,5 mmol. Karakterisasi KCKT menunjukkan kemurnian sampel masih rendah karena terdapat beberapa puncak minor, sedangkan spektrofotometri massa mengonfirmasi terbentuknya FIGP dengan puncak m/z 431 [M−H]⁻. Uji aktivitas antioksidan metode DPPH menghasilkan nilai IC50 rata-rata sebesar 1522,525 ppm yang menunjukkan aktivitas antioksidan sangat lemah atau tidak memiliki aktivitas antioksidan sama sekali. Penelitian selanjutnya disarankan melakukan pemurnian menggunakan kromatografi kolom dengan fase diam C18 serta karakterisasi lanjutan menggunakan NMR untuk memastikan kemurnian dan struktur tetrapeptida.
References
Baliyan, S., Mukherjee, R., Priyadarshini, A., Vibhuti, A., Gupta, A., Pandey, R. P., & Chang, C. (2022). Determination Of Antioxidants By Dpph Radical Scavenging Activity And Quantitative Phytochemical Analysis Of.
Chi, C.-F., Wang, B., Hu, F.-Y., Wang, Y.-M., Zhang, B., Deng, S.-G., & Wu, C.-W. (2015). Purification And Identification Of Three Novel Antioxidant Peptides From Protein Hydrolysate Of Bluefin Leatherjacket (Navodon Septentrionalis) Skin. Food Research International, 73, 124–129. Https://Doi.Org/10.1016/J.Foodres.2014.08.038
Chi, C., Wang, B., Wang, Y., & Zhang, B. (2015). Isolation And Characterization Of Three Antioxidant Peptides From Protein Hydrolysate Of Bluefin Leatherjacket ( Navodon Septentrionalis ) Heads. Journal Of Functional Foods, 12, 1–10. Https://Doi.Org/10.1016/J.Jff.2014.10.027
Fitriana, A., Kurniaty, N., Maharani, R., Farmasi, P., & Bandung, U. I. (2022). Sintesis Senyawa Heksapeptida Siklik Analog Pipecolisporin ( Pro-Lys-Pipe-Trp- -Ala-Phe ) Dengan Metode Kombinasi Fasa Padat Dan Fasa Larutan. Bandung Conference Series: Pharmacy, 2(2), 1–4.
Handito, D., Basuki, E., Saloko, S., Dwikasari, L. G., Triani, E., Mataram, U., Kedokteran, F., & Mataram, U. (2022). Analisis Komposisi Bunga Telang ( Clitoria Ternatea ) Sebagai Antioksidan Alami Pada Produk Pangan. 4(November 2021), 23–24.
Harieni, S., & Priyadi, S. (2018). Perbaikan Kualitas Biji Kedelai Terkontaminasi Logam Berat Dan Formasi Komplek Phytochelatin. Jurnal Ilmiah Agrineca, 18(1).
Ismillayli, N., Hermanto, D., Andayani, I. G. A. S., Honiar, R., Zuryati, U. K., Mariana, B., & Shofiyana, L. M. (2020). Determination Of Ascorbic Acid Content Using The Reverse Phase – High Performance Liquid Chromatography ( Rp-Hplc ) Method. Al-Kimia, 8(2), 168–176. Https://Doi.Org/10.24252/Al-Kimiav8i2.15097
Kurniaty, N., & Mubarok, P. (2020). Sintesis Tetrapeptida Antioksidan Tkps Dengan Metode Fasa Padat. Chimica Et Natura Acta, 8(2), 89. Https://Doi.Org/10.24198/Cna.V8.N2.30345
Laksono, B. A., Rif’at, N. A., Arsyah, T. ‘Afiy, Hanifah, E. A., Astuti, E. W., Rakhmawati, H. R., Cahyani, C. D., Najwa, H., Adyatama, A. Y., Septiyani, D., Rachman, Z. I., Kirana, A. R. M., Purnomo, A. T., & Sari, R. (2023). Evaluation Of Oral Preparations Of Vitamin E As Antioxidant Using Dpph Method ( Diphenyl Picrylhydrazyl ) Evaluasi Sediaan Vitamin E Oral Sebagai Antioksidan Menggunakan Metode Dpph ( Diphenyl Picrylhydrazyl ). Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, 10(1), 12–16. Https://Doi.Org/10.20473/Bikfar.V10i1.47115.Copyright
Maharani, R., Octavia, S. M., Zainuddin, A., Hidayat, A. T., Sumiarsa, D., Harneti, D., & Supratman, U. (2019). Sintesis Tetrapeptida Pssy Dengan Metode Fasa Padat. Chimica Et Natura Acta, 7(2), 69–75.
Mueller, L. K., Baumruck, A. C., Hanna Zhdanova, A., & Tietze, A. A. (2020). Challenges And Perspectives In Chemical Synthesis Of Highly Hydrophobic Peptides. Frontiers In Bioengineering And Biotechnology, 8(March), 1–17. Https://Doi.Org/10.3389/Fbioe.2020.00162
Muna, L. N. (2022). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Daun Kelor ( Moringa Oleifera ) Dengan Metode Dpph Serta Analisis Kualitatif Kandungan Metabolit Sekunder. Sasambo Journal Of Pharmacy, 3(2), 91–96.
Munadi, R. (2020). Analisis Komponen Kimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rimpang Jahe Merah (Zingiber Officinale Rosc. Var Rubrum). Cokroaminoto Journal Of Chemical Science, 2(1), 1–6.
R.B, Merrifield. (1963). Solid Phase Peptide Synthesis. I. The Synthesis Of. Journal Of The American Chemical Society, 85(14), 2149–2154.
Rizikiyan, Y., & Pandanwangi, S. (2019). Uji Aktivitas Antioksidan Lipstik Sari Buah Naga Super Merah (Hylocereus Costaricensin L.) Dengan Metode Dpph (1,1 Difenil-2-Pikrilhidrazil). Jurnal Kesehatan, 6(2).
Sopiah, S., Kurniaty, N., & Wisnuwardhani, H. A. (2020). Sintesis Tetrapeptida Ylya ( Tyr-Leu-Tyr-Ala ) Sebagai Kandidat Antioksidan Dengan Metode Solid Phase Peptide Synthesis. Prosiding Farmasi, 6(2), 121–127. Https://Doi.Org/Http://Dx.Doi.Org/10.29313/.V6i2.22571
Sulistyani, M., Huda, N., Prasetyo, R., & Alauhdin, M. (2023). Calibration Of Microplate Uv-Vis Spectrophotometer For Quality Assurance Testing Of Vitamin C Using Calibration Curve Method. Indonesian Journal Of Chemical Science, 12(2).
Susmayanti, W., & Rahmadani, A. (2023). Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Daun Melinjo (Gnetum Gnenom L.) Menggunakan Metode Cuprac (Cupric Ion Reducing Antioxidant Capacity). Indonesian Journal Of Pharmacy And Natural Product, 06(1), 97–106.
Vokasi, J., Kurniasih, E., Niaga, J. T., Lhokseumawe, P. N., Kimia, J. T., Lhokseumawe, P. N., Timu, J., Bebas, R., & Baca, R. (2019). Sosialisasi Bahaya Radikal Bebas Dan Fungsi Antioksidan Alami Bagi Kesehatan. 3(1), 1–7.
World Health Organization, (Who). (2024). Household Air Pollution. World Health Organization, (Who).
Yulianti, R., & Kurniaty, N. (2022). Sintesis Tetrapeptida Slya ( Ser-Leu-Tyr-Ala ) Sebagai Kandidat Antioksidan Dengan Metode Solid Phase Peptide Synthesis. Jurnal Riset Farmasi (Jrf), 2(1), 9–15.
Zaky, A. A., Simal-Gandara, J., Eun, J., & Shim, J. (2022). Bioactivities , Applications , Safety , And Health Benefits Of Bioactive Peptides From Food And By-Products : A Review. 8(January), 1–18. Https://Doi.Org/10.3389/Fnut.2021.815640
Zaky, M., Rusdiana, N., & Darmawati, A. (2021). Formulasi Dan Evaluasi Fisik Sediaan Gel Antioksidan Ekstrak Etanol 70% Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi L.) Menggunakan Metode Dpph. Jurnal Farmagazine, Viii(2), 26–36.
